醫(yī)學(xué)碩士開題報告
在人們越來越注重自身素養(yǎng)的今天，報告使用的次數(shù)愈發(fā)增長，不同種類的報告具有不同的用途。那么，報告到底怎么寫才合適呢？下面是小編幫大家整理的醫(yī)學(xué)碩士開題報告，供大家參考借鑒，希望可以幫助到有需要的朋友。
一、立題依據(jù)（科學(xué)意義及國內(nèi)外現(xiàn)狀分析及參考文獻(xiàn)）
惡性黑色素瘤是一種高度惡性且侵襲性的癌之一，多發(fā)生于皮膚，早期發(fā)生血行轉(zhuǎn)移。對放、化療不敏感，在世界范圍內(nèi)發(fā)病率增高，人們一直在期待著可以征服惡性黑素瘤的新的療法的出現(xiàn)！
最近大量的數(shù)據(jù)表明惡性腫瘤的發(fā)展與T—鈣粘蛋白的表達(dá)變化相關(guān)、T—鈣粘蛋白已在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、肺癌[1—3] 、胃癌、胰腺癌、卵巢癌[4—9]等多種惡性腫瘤中被檢測到表達(dá)減少、最近的研究表明T/H—鈣粘蛋白在乳腺癌中的重新表達(dá)能抑制腫瘤細(xì)胞的生長，降低體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞的侵襲潛能[1]、T/H—鈣粘蛋白這個新型鈣粘蛋白分子在人類許多癌細(xì)胞中表達(dá)都降低表明它或許在腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[10]及維持正常細(xì)胞的表型中起重要作用[11]、T/H—鈣粘蛋白與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切的聯(lián)系，也許它會為腫瘤的診斷和治療帶來新的契機(jī)、T—鈣粘蛋白是否對惡性黑色素瘤也有作用，目前還沒有相關(guān)研究的報道，所以本實驗將進(jìn)行相關(guān)方面的探討性研究！
二、研究內(nèi)容及預(yù)期成果（說明具體研究內(nèi)容、創(chuàng)新點及擬解決的關(guān)鍵問題、預(yù)期成果及提供形式）
研究內(nèi)容：
第一部分：正常表皮組織、痣細(xì)胞及黑色素瘤細(xì)胞中T—cadherin表達(dá)情況
第二部分T—cadherin基因克隆和真核表達(dá)載體的構(gòu)建
第三部分：T—cadherin基因的真核表達(dá)及生物活性分析
創(chuàng)新點：首次將T—cadherin基因轉(zhuǎn)染黑素瘤細(xì)胞
擬解決的關(guān)鍵問題：通過RT—PCR反應(yīng)擴(kuò)增出T—cadherin的基因全長。
預(yù)期成果及提供形式：
觀察T—鈣粘蛋白在正常皮膚組織細(xì)胞、痣細(xì)胞及黑色素瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況！
進(jìn)一步闡明T—鈣粘蛋白作用機(jī)制
T—鈣粘蛋白基因轉(zhuǎn)染入黑色素瘤細(xì)胞后觀察對其增殖和轉(zhuǎn)移活性的抑制情況，探索臨床診斷和治療黑色素瘤及其它腫瘤的方法！
三、研究方案（包括研究方法、技術(shù)路線、研究進(jìn)度安排）
研究方法：
第一部分：正常表皮組織、痣細(xì)胞及黑色素瘤細(xì)胞中T—cadherin表達(dá)情況
免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)
1、材料：從正常人皮膚切取的痣組織，人黑色素瘤細(xì)胞株
2、主要試劑和溶液
（1）第一抗體：兔抗人T—cadherin抗體
（2）第二抗體：生物素標(biāo)記羊抗兔IgG
（3）“三抗”：鏈親和霉素標(biāo)記HRP
3、設(shè)備
4、方法
（1）冷凍切片的免疫染色程序
（2）活細(xì)胞的免疫染色程序
5、熒光顯微鏡檢
注意：為保證結(jié)果的可靠性應(yīng)該同時設(shè)有對照
陽性對照（正常組織）；
陰性對照（PBS代替一抗）以證明抗體的特異性。
第二部分T—cadherin基因克隆和真核表達(dá)載體的構(gòu)建
1、材料：
（1）組織和細(xì)胞
（2）菌株與質(zhì)粒
（3）工具酶
（4）試劑
（5）儀器
2、方法
（1）引物的設(shè)計
（2）總RNA的提取：異硫氰酸胍—酚—氯仿抽提一步法
（3）甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳分析其質(zhì)量，觀察所提RNA有無明顯降解；
（4）逆轉(zhuǎn)錄RT反應(yīng)：為了證實RT反應(yīng)的成功設(shè)管家基因GAPDH為內(nèi)對照
（5）PCR擴(kuò)增：利用上下游引物，在DNA聚合酶下對目的片段進(jìn)行擴(kuò)增，PCR過程設(shè)β—actin為內(nèi)對照
（6）PCR產(chǎn)物的回收、純化
（7）PCR產(chǎn)物的克隆
（8）DNA序列測定
（9）真核重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
（10）陽性重組質(zhì)粒的鑒定和篩選
（11）質(zhì)粒的大量提取
（12）轉(zhuǎn)染黑色素瘤細(xì)胞
第三部分：T—鈣粘蛋白基因的真核表達(dá)及生物活性分析
1、材料
2、方法
（1）轉(zhuǎn)染細(xì)胞的培養(yǎng)
（2）Western印跡法檢測轉(zhuǎn)染后蛋白的表達(dá)
（3）流式細(xì)胞周期分析
（4）凋亡的檢測
技術(shù)路線圖：
研究進(jìn)度安排：
20xx、9——20xx、7學(xué)習(xí)學(xué)位課程，查閱文獻(xiàn)，完成課題設(shè)計
20xx、9——20xx、9基本完成實驗研究工作
20xx、10——20xx、3完成實驗補(bǔ)遺工作并進(jìn)行統(tǒng)計分析，撰寫論文
20xx、4——20xx、6論文答辯
四、經(jīng)費預(yù)算
試劑費用：15000元組織及細(xì)胞：1000元
文獻(xiàn)資料費：500元
論文打印費：1000元
答辯費：1500元
總計：19000元
五、課題可行性分析
實驗在導(dǎo)師的指導(dǎo)下進(jìn)行，導(dǎo)師段昕所教授、主任醫(yī)師對黑色素瘤的診斷治療、檢測方法和研究進(jìn)展有深入的了解，對本課題的研究設(shè)計及實驗有重要的指導(dǎo)意義。
已完成黑色素瘤及T—鈣粘蛋白研究最新進(jìn)展的文獻(xiàn)檢索和綜述報告工作。
所有實驗均在承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院皮膚病研究室和中心實驗室完成。實驗室的老師實驗技術(shù)熟練，在細(xì)胞培養(yǎng)、免疫組化及分子生物學(xué)等方面都可給予指導(dǎo)；實驗所需的科研儀器設(shè)備實驗室均具備。
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